细胞毒性检测方法有哪些？细胞毒性测试

　　1.有源产品相关

　　多参数监护仪、超声诊断设备、输液泵和输液控制器、体温计、无创血压监测设备、脉动光电血氧计设备、高频电外科手术设备、神经和肌肉刺激器、内窥镜、脑电图机、手术，化妆，诊断和治疗激光设备、心电诊断设备等，临床化学分析仪器、免疫化学分析仪器、全自动血液分析仪器、微生物分析仪器，全自动蛋白分析仪，生化分析仪，血球分析仪，血气分析仪，化学发光免疫分析仪，尿沉渣分析仪，血凝仪，全自动血液流变仪，全自动内细菌培养分析仪，微生物鉴定及细菌药敏分析仪，核酸纯化仪，血液组织培养仪，冷冻切片机，生物组织脱水机，组织包埋机，离心机，搅拌机，染色机，高温脉动真空灭菌器，高温蒸气灭菌器，红外电热灭菌器，高温消毒清洗机，生物安全柜等

　　2.无源产品相关

　　1.表面接触器械

　　电*、体外假肢、固定带、压缩绷带、和各种类型的监测器等

　　接触镜、导尿管、阴道内或消化道器械(胃管、结肠镜、胃镜)、气管内插管、支气管镜等

　　用于溃疡、烧伤、肉芽组织的敷料或护理器械和封闭敷贴等

　　2.外部接入器械

　　输血、输液器、延长器、转移器等

　　腹腔、关节内窥镜、引流系统、牙科充填材料、皮肤钉等

　　血管内导管、临时性起搏电*、透析器、透析管路和附件、血管吸附剂、免疫吸附剂等

　　3.植入器械

　　矫形钉、人工关节、骨假体、骨水泥和骨内器械，起搏器、植入性给药器械、神经肌肉传感器和刺激器、人工肌腱、乳房植入物、人工喉、骨膜下植入物、结扎夹等

　　起搏器电*、人工动静脉瘘管、心脏瓣膜、人工血管、体内给药导管和心室辅助器械等

　　检测介绍 / Inspection Introduction

　　什么是体外细胞毒性试验？

　　体外细胞毒性试验是一种在离体状态下模拟生物体生长环境，检测医疗器械及生物材料接触机体组织后所发生的细胞溶解、抑制细胞生长和其他毒性作用的体外试验。体外细胞毒性试验是医疗器械生物学评价体系中*重要的检测指标之一，几乎也是医疗器械及生物材料临床应用前的必选项目;

　　细胞毒性检测费用：(本实验以报价单的形式官方报价，需要可联系医疗相关工程师获取)

　　检测标准 / Testing Standardn

　　体外细胞毒性试验依据的相关标准

　　ISO 10993-5:2009 Biological Evaluation of Medical Devices -- Part 5: Tests for in vitro Cytotoxicity

　　GB/T16886.5-2007医疗器械生物学评价 第5部分：体外细胞毒性试验，GB/T16886是由ISO 10993转化过来的标准

　　GB/T 16175-2008 医用有机硅材料生物学评价试验方法

　　GB/T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法 第2部分：生物试验方法

　　YY/T0127.9-2009口腔医疗器械生物学评价 第2单元 试验方法 细胞毒性试验：琼脂扩散法及滤膜扩散法

　　其他 / Other

　　体外细胞毒性试验的目的和意义

　　目的：评级医疗器械和生物材料致细胞毒性反应的潜在性，并预测*终生物体应用时的组织细胞反应。通过体外细胞培养技术，可检测供试品接触细胞后细胞发生生长抑制、功能改变、细胞溶解、死亡或其他毒性反应。

　　意义：可在短时间内较经济、简便地筛选出批量供试品的细胞毒性，它为动物试验的进行与否提供了先决条件，对新型医疗器械及生物材料的研制和应用提供了重要保证。

　　体外细胞毒性试验方法

　　体外细胞毒性试验具有通用性，可以适用于各种医疗器械和生物材料的评价，GB/T16886.5标准不是规定一个单一的试验方法，而是规定一个试验方案，需要在一系列试验步骤中判断，以选出*合适的试验，试验主要分三类：浸提液试验，直接接触试验和间接接触试验(琼脂扩散试验和滤膜扩散试验)。

　　由于医疗器械产品和材料的多样性，植入机体环境中的变异性，与机体相互作用的复杂性等因素，选择哪种方法进行体外细胞毒性评价，不同的试验人员会有不同的选择。当一个评价项目具有多个试验方法时，应考虑试验的原理、灵敏性、可选性、可定量性、重现性、试验材料的适用性及局限性等因素进行选择。例如浸提液法适合检测溶出物的毒性;直接接触法对材料的细胞毒性敏感性*高，可检测出材料微弱的细胞毒性，间接接触法中的琼脂扩散试验适合于毒性大的大批量材料筛选，滤膜扩散法适合于小分子量毒性材料的评价。以上各种方法因原理不同，各有特点，应根据试验材料本身理化性质、毒性作用强弱及其用途，正确地选择试验方法。

　　浸提液试验-MTT法，XTT法和WST-8法比较

　　MTT(二苯基四氮唑)法，又称MTT比色法，检测原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法有灵敏度高、较经济的优点。

　　XTT(二甲氧唑黄)是类似MTT的化合物，XTT法检测原理与MTT法相同。在电子耦合试剂存在的情况下，活细胞线粒体中存在与辅酶Ⅱ相关的脱氢酶，可将黄色的XTT还原成水溶性的橘黄色的甲瓒，生成的甲瓒能够溶解在组织培养基中，不形成颗粒，可直接用酶标仪测定吸光值。

　　WST-8(四唑单钠盐)属于MTT的升级产品，检测原理是在电子耦合试剂存在的情况下，WST-8可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲瓒产物。产物颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450nm波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。该方法简便、准确、灵敏度高，但是价格比MTT法略高。